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由於其對DNA干擾(DNAi)的特性(參見RNAi),目前被積極地應用於遺傳工程中,作為基因體剪輯工具,與鋅指核酸酶(ZFN)及類轉錄活化因子核酸酶(TALEN)同樣利用非同源性 ...
CRISPR
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CRISPR的可能機制示意圖[1]
CRISPR(IPA:/ˈkrɪspər/;DJ:/ˈkrispə/;KK:/ˈkrɪspɚ/)
1987年日本科學家在大腸桿菌的基因組發現有特別的規律序列,某一小段DNA會一直重複,重複片段之間又有相等長的間隔,此序列稱為CRISPR(clustered,regularlyinterspaced,shortpalindromicrepeats)。
它是存在於細菌中的一種基因,該類基因組中含有曾經攻擊過該細菌的病毒的基因片段。
細菌透過這些基因片段來偵測並抵抗相同病毒的攻擊,並摧毀其DNA。
這類基因組是細菌免疫系統的關鍵組成部分。
透過這些基因組,人類可以準確且有效地編輯生命體內的部分基因,也就是CRISPR/Cas9基因編輯技術。
CRISPR/Cas系統,為目前發現存在於多數細菌與絕大多數的古菌中的一種後天免疫系統[2],以消滅外來的質粒或者噬菌體[3][4],並在自身基因組中留下外來基因片段作為「記憶」[5]。
臺灣翻譯全名為常間回文重複序列叢集/常間回文重複序列叢集關聯蛋白系統,中國大陸則為規律間隔成簇短回文重複序列/規律間隔成簇短回文重複序列相關蛋白系統(或相關核酸酶系統)(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats/CRISPR-associatedproteins)。
目前已發現三種不同類型的CRISPR/Cas系統,存在於大約40%和90%已定序的細菌和古菌中[6][7]。
其中第二型的組成較為簡單,以Cas9蛋白以及嚮導RNA(gRNA)為核心的組成。
Cas9是第一個被廣泛應用的CRISPR核酸酶,其次是Cpf1,其在新澤西弗朗西斯菌(英語:Francisellanovicida)的CRISPR/Cpf1系統中被發現[8][9]。
其它這樣的系統被認為存在[10]。
由於其對DNA干擾(DNAi)的特性(參見RNAi),目前被積極地應用於遺傳工程中,作為基因體剪輯工具,與鋅指核酸酶(ZFN)及類轉錄活化因子核酸酶(TALEN)同樣利用非同源性末端接合(NHEJ)的機制,於基因體中產生DNA的雙鏈斷裂以利剪輯。
第二型CRISPR/Cas經由遺傳工程的改造應用於哺乳類細胞及斑馬魚的基因體剪輯[11][12]。
其設計簡單以及操作容易的特性為最大的優點,目前已逐步應用在各種不同的模式生物當中。
Cascade(CRISPR相關病毒防禦複合體)
StructureofcrRNA-guidedE.coliCascadecomplex(Cas,藍色)boundtosingle-strandedDNA(橘色).
標識
生物
大腸桿菌(Escherichiacoli)
符號
?
PDB
4QYZ
其他數據
目次
1發現歴史
1.1Cas9
1.2Cpf1
2評價
3參考文獻
4延伸閱讀
5參閱
6外部連結
發現歴史[編輯]
聚簇DNA重複的發現始於世界三個地區的三個獨立地點。
我們今天稱為CRISPR的基因組重複群集,即原核生物擬核DNA鏈中的叢生重複序列,在1987年一份由大阪大學的石野良純領銜的大腸桿菌研究報告中被首次描述[13]。
2000年,相似的重複序列在其它真細菌和古細菌中被發現,並被命名為短間隔重複序列(ShortRegularlySpacedRepeats,SRSR)[14]。
2002年SRSR被重命名為CRISPR,其中一部分基因編碼的蛋白為核酸酶和解旋酶,這些關聯蛋白(Cas,CRISPR-associatedproteins)與CRISPR組成了CRISPR/Cas系統[15]。
Cas9[編輯]
科學家還研究了來自化膿性鏈球菌(英語:Streptococcuspyogenes)的更簡單的CRISPR系統,其依賴於蛋白Cas9。
Cas9內切核酸酶是包含兩個小RNA分子的四組分系統[16]。
詹妮弗·杜德納、埃馬紐埃爾·卡彭蒂耶及張鋒各自獨立的探索CRISPR關聯蛋白,了解細菌如何在它們的免疫防禦使用間隔(spacer)。
他們共同研究一個比較簡單的依賴於稱為Cas9蛋白的CRISPR系統。
Cpf1[編輯]
在2015年,核酸酶Cpf1被發現在新澤西弗朗西斯菌(英語:Francisellanovicida)的CRISPR/Cpf1系統[8][9]。
其他這樣的系統被認為存在[10]。
Cpf1與Cas9的有幾個關鍵差異,包括:
1.DNA斷裂方式不同:導致雙鏈DNA中的「交錯」或「黏性(stickyend)」切割,而不是由Cas9產生的「鈍的(Bluntend)」切割。
2.相鄰間隔原基序(英語:Protospaceradjacentmotif)(PAM)不同:Cpf1辨認「富含T鹼基」的PAM,而Cas9辨認NGG為PAM,可為Cas9提供替代的標靶序列。
3.僅需要CRISPRRNA(crRNA)用於成功標定(使用Cas9同時需要crRNA和一個反向活化crRNA(英語:Trans-activatingcrRNA)(tracrRNA))。
評價[編輯]
在2012年和2013年,CRISPR是《科學》年度突破的第二名。
在2014年和2016年被《麻省理工科技評論》評為10項突破技術之一[17][18]。
參考文獻[編輯]
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延伸閱讀[編輯]
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參閱[編輯]
基因編輯嬰兒事件
基因剔除
RNA干擾
小分子干擾核糖核酸(siRNA)
類轉錄活化因子核酸酶(TALEN)
鋅指核酸酶(ZFN)
生物恐怖主義
生物武器
合成生物學
外部連結[編輯]
AdvancedGeneEditing:CRISPR-Cas9(頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)CongressionalResearchService
(英文)JenniferDoudnatalk:GenomeEngineeringwithCRISPR-Cas9:BirthofaBreakthroughTechnology(頁面存檔備份,存於網際網路檔案館)
取自「https://zh.wikipedia.org/w/index.php?title=CRISPR&oldid=70908098」
分類:基因工程免疫學非編碼RNA重複DNA序列分子遺傳學隱藏分類:CS1英語來源(en)引文格式1維護:PMC格式
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